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本制品是基于常规PCR技术开发的专门用于真菌研究检测的试剂盒

真菌(Fungus)是具细胞壁，以寄生或腐生方式生存的一类真核微生物。如今，随着放射治疗、化学治疗、广谱抗生素以及免疫制剂的广泛应用，真菌感染的几率大大增加，真菌感染引起的疾病也日益严重。同时，真菌感染往往是致命的，例如念珠菌病和曲霉病的病死率达到了惊人的36％～63％和70％以上。真菌引起的疾病因其诊断困难、病死率高而备受医学界的重视。此外，食品和中药材的真菌污染也比较严重，给人们的生命健康带来较大威胁。而传统的诊断方法，如组织病理、真菌镜检和培养，耗时长、敏感度低，难以满足临床的需求，越来越多的研究需要开发取材方便、耗时短、准确客观的非培养诊断方法。因此快速非培养法检测真菌具有重要的意义。

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
   
2. 产品经过精心优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。
   
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
   
4. 特异性高，引物是根据真菌通用DNA高度保守区设计，不会跟除此之外的其它DNA发生交叉反应。
   
5. 本制品足够50次20μL体系的PCR反应。
   
6. 本制品只能用于定性实验，不能用于定量。
   
7. 本制品只能用于科研。

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL真菌通用PCR阳性对照(1×10⁷拷贝/μL，本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
   
2. 用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的核酸提取试剂盒或免提取核酸释放剂。

3. 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
   

   成分	样品管N+2个	PCR阴性对照	PCR阳性对照
   2×PCR MasterMix	各10μL	10μL	各10μL
   真菌通用PCR引物混合液	各3μL	3μL	各3μL
   N+2个待测DNA样本	各7μL	不加	不加
   超纯水	不加	7μL	不加
   真菌通用PCR阳性对照10倍稀释液	不加	不加	7μL

4. 上机进行PCR，PCR反应参数：
   

   过程	温度	时间
   预变性	94℃	10min
   PCR反应 (40个循环)	94℃	15sec
   	58℃	35sec

5. 取5μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%～2.0%的琼脂糖凝胶。
   
6. 如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。
   
7. 如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。
   
8. 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。